Lífsmásjárskoðun varðandi rúmmál vefjablokka
Líffræðileg smásjárskoðun Hingað til eru köld festing, frosinn ofurþunnur skurður og frostþurrkun venjubundin aðferðir við röntgenmyndatökur á vefjum og frumum. Upplýsingar um þessa aðferð eru útskýrðar sem hér segir:
Fyrir líffræðilegar smásjár með eimsvala er hægt að færa eimsvalann upp og niður til að gera birtustigið í meðallagi og einnig er hægt að breyta ljósopi breytilegra ljóss til að ná í meðallagi 9b birtu. Ef ljósið er sólríkt er hægt að hækka eimsvalann á viðeigandi hátt og hægt er að stækka ljósop breytilegra ljósgjafa á viðeigandi hátt. Ef ljósið er of sterkt er hægt að lækka þéttilinsuna á viðeigandi hátt og hægt er að minnka ljósop ljóssins sem skerst á viðeigandi hátt. Ef þér finnst enn töfrandi í þessu tilfelli geturðu valið viðeigandi síu og sett hana á festinguna undir eimsvalanum. Þessi eik mun geta fengið birtustigið sem fullnægir þér. Að stilla efri og neðri stöðu eimsvalans, stilla ljósopsstærð breytilegs ljóslestrars og velja viðeigandi síu krefst auðvitað ákveðins tíma æfinga til að öðlast reynslu.
Mjög mikilvægt atriði í líffræðilegri smásjárskoðun er að við sýnatöku og aðskilnað frumna, eftir frostþurrkun og innfellingu plastefnis (FD), eftir frystingu ofurþunnt efni og eftir frostþurrkun, innihald 65 frumefna í hverjum hluta verður að fara varlega með. Ekki er hægt að skemma frumurnar sem á að greina. Vegna þess að röntgen örgreining felur ekki aðeins í sér mörg skref heldur kostar hún líka mikið. Ef greindar frumur eru skemmdar frumur eða dauðar frumur eftir langa og margra þrepa vinnslu er mjög miður að draga rangar ályktanir. Til dæmis hafa hjartavöðvafrumur aðskildar með kollagenasameðferð tvenns konar form, önnur er langur stöng
Lífsmásjár Magn og dreifing salta í þessum tveimur tegundum frumna er mjög mismunandi. Na er mjög hátt og K er mjög lágt í hringlaga hjartavöðvafrumum og styrkur ca í þráðormum er mjög hár. Eftir að hafa athugað með öðrum greiningaraðferðum er sannað að hátt Na og lágt K í kringlóttum frumum og hátt Ca í hvatberum stafar af skemmdum á frumuhimnunni við frumuaðskilnaðinn. Ískalda festingaraðferð frumna og vefja er venjulega að taka upp slökkvun og festingu fyrst og geyma þær síðan í fljótandi köfnunarefni. Slökkvandi festing er mjög mikilvæg fyrir áhrif varðveislu. Lifandi frumur eða ferskir vefir eru ríkir af vatni. Þegar slökkt er, eru þeir hlutar frumna eða vefja sem eru í beinni snertingu við mulið kælimiðil (sérstaklega þegar slökkt er með fljótandi köfnunarefni) oft frosnir og festir fyrst og mynda þannig „skel“ sem hindrar. Miðhlutar frumanna voru mulið og kalt fast. Þess vegna, þegar X-line örsvæðisgreining er gerð, kemur oft í ljós að það eru ískristallar í miðju stærri frumna. Til að koma í veg fyrir að þetta gerist er efni með hærra bræðslumark en fljótandi köfnunarefnis en lægra en 806c notað sem brotinn kælimiðill. Það eru til mörg slík efni, en auðveldast að fá, ódýrast er þétt própan (suðumark - 42.120c, bræðslumark - 187.10c, mólþyngd 44.1), og kælihraði er sá hraðasti . En ókosturinn er sá að hann er eldfimur.
Líffræðileg smásjá getur sett vöðvaþræðina á sérstakan rekki, þannig að þegar vöðvaþræðir samdráttur nær ákveðnum áfanga og þarf að laga, byrjaðu strax á stútnum til að úða fljótandi própani í vöðvaþræðina til að slökkva og laga það. Síðan voru vöðvaþræðir ásamt grindinni teknir út og settir í fljótandi köfnunarefni. Ef þú festir blóðfrumur eða einangraðar frumur skaltu fyrst einbeita frumunum með skilvindu á lágum hraða, flytja frumurnar í silfurhettuglas með góða hitaleiðni, setja hettuglasið í fljótandi própan og frysta til festingar. Þegar rottubrisið var fest á Hall rannsóknarstofunni voru stálkubbarnir tveir forkældir með fljótandi helíum (eða fljótandi köfnunarefni) og koparkubbarnir tveir voru klemmdir með töngum og settir framan og aftan á brisið til að slökkva og festa brisið. Hægt er að geyma vefi eða frumur í fljótandi köfnunarefni til langtímageymslu eftir slökkt og festingu.
Líffræðileg smásjárskoðun Til viðbótar við virtustu frosna öfgaþunnu sneiðaraðferðina er hér önnur útfellingartækni sem vísindamenn nota. Efni er bætt við til að mynda set með efnishlutanum sem á að greina til að stöðva það fyrir greiningu og setið er síðan greint. Til dæmis notar fólk oft oxalat og pýróantímónat til að setja ca í vöðvafrumur. Hið fyrra er ekki nógu næmt fyrir lágum styrk Ca í umfrymi; pýróantímónat er næmari og getur myndað rafeindaþéttar útfellingar með fríu Ca í heilanum, en pýróantímónat er ekki samhæft við natríum, mangan, baríum, járn Útfellingar myndast einnig og eru minna sértækar. Undirbúningsferlið sýnis er svipað og undirbúningur á venjulegum sýnishornum með rafeindasmásjá með öfgaþunnum hluta, munurinn er sá að 3 prósent kalíumpýróantímónat (fosfatjafnalausn saltvatns, pH 7,6) var fest í 6 klukkustundir fyrir festingu, og á litaða vöðvaþunnu hlutanum, Svartar útfellingar sáust í miðlínum A og 2 á hverri sarkómer og ólitaðir hlutar voru notaðir til röntgengeisla örgreiningar. Díamínóbensidín tetrahýdróklóríð (DAB) var notað til að fella út efni sem innihalda hem og svo framvegis. Hægt er að íhuga samsetningu vefjaefnafræðilegra úrkomuviðbragða og röntgengeisla ör-aðgreiningarbrúar á rannsóknarstofum sem eru ekki með frosna öfgaþunnan hluta. Hægt er að gera hálf-magn í samræmi við hámarkshæð frumefna sem á að greina
