Bein talning á örverum með smásjá
Tilraunaregla
Bein talning undir smásjá með því að nota blóðfrumnamæli er almennt notuð örverutalningaraðferð. Kosturinn við þessa aðferð er að hún er leiðandi og fljótleg. Settu viðeigandi þynntu bakteríusviflausn (eða grósviflausn) í talningarhólfið á milli glærunnar og hlífðarglersins á blóðfrumnamælinum og teldu undir smásjá. Þar sem rúmmál talningarhólfsins er fast (0.1mm2) er hægt að breyta því í heildarfjölda örvera á rúmmálseiningu í samræmi við fjölda örvera sem sést í smásjánni. Vegna þess að þessi aðferð telur summan af lifandi og dauðum bakteríum er hún einnig kölluð heildartalningaraðferðin.
Blóðkornamælir er venjulega sérstök glerrennibraut þar sem fjórar raufar mynda þrjá palla. Pallurinn í miðjunni skiptist í tvo helminga með stuttri láréttri gróp. Rat er grafið á pallinn á hvorri hlið. Hverri rist er skipt í níu stóra ferninga. Stóra torgið í miðjunni er talningarsalurinn. Örverur eru taldar í talningarklefanum. Uppbygging blóðkornatalningartöflunnar er sýnd á mynd Ⅷ-1.
Mælikvarði talningarherbergisins hefur yfirleitt tvær forskriftir, önnur er sú að stórum ferningi er skipt í 16 miðferninga og hverjum miðreit er skipt í 25 litla ferninga (Mynd Ⅷ-2); hitt er stórt torg. Ferningnum er skipt í 25 miðferninga og hverjum miðferningi er skipt í 16 litla ferninga (Mynd Ⅷ-1, C). En það er sama hvers konar talningartöflu það er, fjöldi lítilla ferninga í hverjum stórum ferningi er sá sami, það er 16×25=400 litlir ferningar, eins og sýnt er á mynd Ⅷ-2.
Hliðarlengd hvers stórs fernings er 1 mm og flatarmál hvers stórs fernings er 1 mm2. Eftir að hlífðarglerið er þakið er hæðin á milli glersins og hlífðarglersins 0,1 mm, þannig að rúmmál talningarhólfsins er 0,1 mm3.
Þegar talið er, teljið venjulega heildarfjölda baktería í miðri töflunum fimm, fáið síðan meðalgildi hvers miðrifs og margfaldar síðan með 16 eða 25 til að fá heildarfjölda baktería í stóru ristli, og síðan Umreiknað í heildarfjöldi baktería í 1ml bakteríulausn.
Tæki til rannsóknarstofu
Hemocytometer, smásjá, coverslip, dauðhreinsuð háræða;
Tilraunaefni
Saccharomyces cerevisiae dreifa
Tilraunaaðferð (bein talningaraðferð með örveru smásjá)
1. þynning
Þynnið Saccharomyces cerevisiae sviflausnina á réttan hátt. Ef bakteríulausnin er ekki þykk þarf ekki að þynna hana.
2. Smásjá talningarherbergi
Áður en sýnum er bætt við skal framkvæma smásjárskoðun á talningarhólfinu á talningarplötunni. Ef það er óhreinindi þarf að þrífa það áður en talið er.
3. bæta við sýnishorni
Hyljið hreinu og þurra blóðkornamælisplötuna með hlífðargleri og notaðu síðan dauðhreinsaðan smámunndropa til að sleppa litlum dropa af þynntri Saccharomyces cerevisiae lausninni frá brún hlífðarglersins (ekki of mikið), þannig að bakteríulausnin er nálægt bilinu meðfram bilinu. Háræða osmósa fer inn í talningarhólfið af sjálfu sér og hægt er að fylla almenna talningarhólfið með bakteríuvökva. Gætið þess að hafa ekki loftbólur.
4. smásjá telja
Eftir að hafa hvílt í 5 mínútur, settu blóðkornamælirinn á sviðið smásjánnar, notaðu fyrst lágstyrkslinsu til að finna staðsetningu talningarhólfsins og skiptu síðan yfir í hástyrkslinsu til að telja. Ef í ljós kemur að bakteríulausnin er of þykk eða of þunn fyrir talningu er nauðsynlegt að stilla þynninguna aftur fyrir talningu. Almennt þarf sýnisþynningin um 5-10 bakteríur í hverri frumu. Hvert talningarhólf velur bakteríurnar í 5 miðri rist (valfrjálst 4 horn og miðlæg rist) til að telja. Bakteríurnar á ristlínunni eru almennt aðeins taldar á efri og hægri línunni. Ef ger er brjóstandi, þegar stærð brumlíkamans nær helmingi móðurfrumunnar, teljið tvær bakteríur. Teldu sýni til að reikna út bakteríuinnihald sýnisins út frá gildunum sem talin eru í talningarhólfunum tveimur.
5. Hreinsun blóðkornamælisins
Eftir notkun skal skola blóðkornatalningarplötuna á krananum með vatnsdælum, ekki þvo hana með hörðum hlutum og þurrka hana sjálfur eða með hárþurrku eftir þvott. Smásjárskoðun, athugaðu hvort bakteríuleifar eða önnur setlög séu í hverri frumu. Ef það er ekki hreint þarf að þvo það ítrekað þar til það er hreint.
