Hvernig á að velja rétta flúrljómunarsmásjána
Flúrljómunarsmásjá er staðall smásjármyndabúnaður fyrir rannsóknarstofur og meinafræðideildir. Það notar flúrljómunareiginleika til athugunar og myndatöku. Það er mikið notað í frumulíffræði, taugalíffræði, grasafræði, örverufræði, meinafræði, erfðafræði og öðrum sviðum. Flúrljómunarmyndgreining hefur þá kosti mikils næmni og mikillar sérhæfni og er mjög hentugur til að fylgjast með dreifingu sérstakra próteina og frumulíffæra í vefjum og frumum, rannsókn á samsetningu og samspili, til að fylgjast með líffræðilegum ferlum eins og breytingum á styrk jóna. , o.s.frv.
Val á smásjá
Flúrljómunarsmásjáum er aðallega skipt í þrjá flokka: uppréttar flúrljómunarsmásjár (hentar til skurðar), öfugar flúrljómunarsmásjár (hentar fyrir lifandi frumur, að teknu tilliti til skurðar), stereoscopic flúrljómunarsmásjár (hentar fyrir stærri sýni, svo sem plöntur, sebrafiska (fullorðinn/) fósturvísi), medaka, mús/rottulíffæri osfrv.).
Úrval flúrljómunarsíukubba
Auk þess að taka tillit til örvunar- og útblástursbylgjulengda flúrljómunarnema, þarf val á síublokkum einnig að huga að því hvort það sé ósértæk örvun og krosslitur fyrir marglita merkt sýni. Í tilrauninni verður reynt að velja þá bylgjulengd sem er næst örvunartoppnum fyrir örvun og viðtökusviðið verður að innihalda útblásturstoppinn. Til dæmis er örvunarhámark Alexa Fluor 488 500nm og hægt er að velja 480/40 örvunarsíu í flúrljómunarsmásjá. Hægt er að skipta flúrljómunarsíuteningum sem almennt eru notaðir í flúrljómunarsmásjár í tvær gerðir: langhlið (LP fyrir stutt) og bandpass (BP fyrir stutt), sem einnig þarf að velja eftir þörfum.
Val um flúrljómandi ljósgjafa
Núverandi algengar flúrljósgjafar eru kvikasilfurslampar, málmhalíð lampar og LED ljósgjafar sem hafa þróast hratt á undanförnum árum. Litróf flúrljómandi ljósgjafa er samfellt og ósamfellt og orkan verður mismunandi í mismunandi böndum. Vegna tiltölulega þröngs litrófsbands, stöðugri orkuframleiðslu, langan líftíma, öryggi og umhverfisverndar og margra annarra kosta, er LED ljósgjafinn smám saman að verða aðal ljósgjafinn flúrljómunar smásjár.
confocal smásjá
Í hefðbundinni flúrljómunarsmásjáathugun, vegna skörunar flúrljómandi merkjaefna og sjálfflúrljómunarbygginga, eru þau nátengd, á meðan hefðbundin epi-flúrljómunarsmásjá hlutlæg linsa safnar ekki aðeins ljósi frá brenniplaninu, heldur safnar einnig dreifðu ljósi fyrir ofan og neðan brenniplan , sem leiðir til mjög minni myndupplausnar og birtuskila.
Confocal myndgreining leysir þetta vandamál með því að greina aðeins þann hluta ljóssins sem endurkastast frá brenniplaninu. Ljósgjafinn fer í gegnum pinhole og myndar lítinn og fínan ljósblett á brenniplaninu. Ljósinu sem gefur frá sér brenniplanið er safnað með linsunni. Flest flúrljómun sem gefin er út frá punktinum fyrir ofan eða neðan brenniplan hlutlinsunnar getur ekki runnið saman að litla gatinu. Aðeins flúrljómunin sem er staðsett í brenniplaninu og lítill hluti flúrljómans sem er ekki í fókus getur farið í gegnum nálgauna, á meðan ljósgeislarnir utan brenniplansins renna saman að framan eða aftan á pinhole plötunni og hindrast í að komast inn í skynjarann í gegnum pinnagatið. Myndin sem greind er er myndin frá brenniplaninu, þannig að endanleg myndgæði eru verulega bætt.
Vegna kosta og framkvæmanleika aðgerða leysisskanna confocal smásjánnar er confocal smásjáin ómissandi tilraunaaðstoðarmaður á sviði hárnákvæmni frumulíffræði, grasafræði og frumurannsókna. Á sama tíma, í framtíðinni vísindarannsóknarmiðstöð, mun það vera grunn- og kjarna vísindarannsóknartækið.
