Smásjármyndgreiningarkennslustofa丨Widefield flúrljómunarsmásjá
Í lifandi frumumyndatökuforritum auðveldar breiðsviðsflúrljómunarsmásjárskoðun athugun á gangverki viðloðandi frumna sem ræktaðar eru í sérstökum umhverfishólfum sem eru settar á smásjársviðið. Í grunnstillingu sinni er venjuleg öfug vefræktarsmásjá búin EPI flúrljómun tengd svæðisfylkingarskynjarakerfi (venjulega CCD myndavél), viðeigandi flúrljómunarsíur og lokunarkerfi til að takmarka of mikla útsetningu frumna fyrir skaðlegu örvunarljósi. . Grunnflúrljómunarsmásjárfræði byggir á vandlega samsvöruðum truflunarsíur til að velja sérstakar bandbreiddir til að lýsa og greina útgefið ljós. Ljósgjafar innihalda kvikasilfurs-, xenon- og málmhalíðbogalampa, geislaútvíkkandi leysikerfi og ljósdíóða (LED), sem öll krefjast mismunandi síuforskrifta. Tilbúnar flúorófórar sem notaðar eru í flúrljómunarsmásjárskoðun hafa losunarróf sem ná yfir nær-útfjólubláu, sýnilegu og nær-innrauðu svæðin. Notkun erfðakóðaða flúrljómandi próteina hefur aukið getu flúrljómunarsmásjár í lifandi frumumyndagerð til muna, sem gerir rannsakendum kleift að miða nákvæmlega á undirfrumusvæði sem þeir hafa áhuga á.
Nuohai LS 18, ný tegund ljóssmásjár sem er sjálfstætt þróuð af Nuohai, er sérstaklega hönnuð fyrir þrívíddarmyndatöku í hárri upplausn af gagnsæjum stórum vefjasýnum og er tileinkað því að kanna ýmsa ósnortna vefi eins og heila, milta, smágirni. , nýru, lungu, hjarta og æxli. 3D nákvæm uppbygging líffæra.
Í breiðsviðsflúrljómun hámarkar losunin með fullri ljósopi sem safnað er af smásjármarkmiðinu upptökumerkið en lágmarkar nauðsynlegan lýsingartíma. Þannig er hægt að mynda sýni með mjög stuttum birtutímabilum. Helsti ókosturinn við breiðsviðsmyndatöku er að flúrljómun frá svæðum langt frá brenniplaninu, sem og bakgrunnsmerki, er óæskilegt ljós sem oft byrgir áhugaverða eiginleika. Þess vegna skilar breiðsviðsmyndataka bestum árangri þegar eiginleikarnir sem vekja áhuga eru stórir (eins og frumulíffæri) eða mjög götótt í eðli sínu. Fjölbreytt úrval af lifandi frumusýnum, þar á meðal viðloðandi frumur, bakteríur, ger og mjög þunna vefjahluta, eru tilvalin til að mynda flúrljómun á breiðum sviðum, hins vegar er þykkari vefur (yfir 5 míkron) best notaður með fullkomnari myndgreiningu.
Þó að framfarir hafi orðið í flúrljómun með tilbúnum flúrljómandi litarefnum, skammtapunktum og flúrljómandi próteinum, þá er í sumum tilfellum gagnlegt að sameina flúrljómun með öðrum myndgreiningaraðferðum. Sem dæmi er hægt að nota DIC í tengslum við breiðsviðsflúrljómun til að fylgjast með lífvænleika frumna og almennri formgerð á meðan þú rannsakar áhugaverð fyrirbæri fyrir sérstök merkt markmið. Að fá DIC og flúrljómun í einni mynd er venjulega óframkvæmanlegt, en í rétt stilltri smásjá er hægt að nota þessar tvær aðferðir í röð. Þannig, eftir myndatöku í flúrljómunarham, er hægt að fá DIC myndir úr flúrljómandi merktum sýnum með því að nota sent ljós. Hægt er að sameina þessar tvær myndir við eftirgreiningu. Samtímis öflun DIC og flúrljómunarmynda er möguleg í háþróaðri breiðsviðs smásjárstillingum með því að nota litrófsaðskilin lýsingu (eins og sýnilega og nær-innrauða) og tveggja myndavéla eða tvísýnis myndavélamillistykki. Í flestum leysiskönnun confocal smásjám er hægt að ná myndum í bæði flúrljómun og DIC ham samtímis, sem útilokar þörfina fyrir vinnslu eftir kaup. Einnig er hægt að nota fasaskilaskil og Hoffman mótunarskilaskil í tengslum við breiðsviðsflúrljómunarsmásjárskoðun. Hins vegar, í þessum aðferðum, er hlutlinsan sérstök, hvort sem það er fasahringur eða Hoffman mótunarplata, mun hún valda tapi á losunarstyrk upp á 5-15 prósent.
Greinartengill: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
