Þykktarkröfur ljóssmásjáa fyrir glerrennibrautir
Smásjávötnun og viðhengi sýnis: Vegna endurtekinnar skilvindu tapast frumurnar og því er best að festa frumurnar við yfirborð glerrennibrautar eða plastplötu fyrir sjónsmásjárskoðun, þannig að frumurnar séu þurrkaðar og þurrkaðar saman við glerið. rennibraut eða plastdúka. Kröfur um þykkt glerskyggna í ljóssmásjá Til þess að frumur geti fest sig við glerskyggnur eða plastplötur þarf fyrst að leggja lag af filmu á glerskygjur eða plastplötur. Aðferðin við að leggja filmuna er sem hér segir:
(1) Einfaldasta aðferðin fyrir sjónsmásjárskoðun er að leggja þunnt lag af pólývínýl formlegri (formvar) filmu. Leggið hreinsaðar skyggnur í bleyti í (0.5-1) prósent pólývínýl formlegri klóróformlausn. Eftir að lofthjúpurinn hefur rokið upp kemur hvít filma á glærurnar. Hristið glærurnar nokkrum sinnum í klóróforminu til að filman breytist. Þunnt og tilbúið til notkunar.
(2) Slepptu 0.1 breiddargráðu pólý-L-lýsíni (leysið 1 mg pólý-lýsín upp í 1 ml síaðs vatns við undirbúning) á hreinsaða glerglasið og settu það í 450C birgðakassa eftir að dropinn hefur brotið út . þurrt. Þessi aðferð er best vegna þess að pólý-L-lýsín er jákvætt hlaðið, sem gerir fleiri yfirborðs neikvætt hlaðnar frumur kleift að festast.
(3) Bætið plasma og glýseróli við eimað vatn í hlutfallinu (30--40) prósent og (3-5) prósent í samræmi við kröfur ljóssmásjáarinnar um þykkt glærunnar til að mynda glýserólprótein lausn. Vökvanum er sleppt á hreinsaða glerglasið, brettið upp og þurrkað undir sjónsmásjánni. Lagða próteinfilman er sökkt í 2 prósent glútaraldehýð til að festa próteinið, þvegin og þurrkuð til síðari notkunar. Fyrir notkun er blóðvökvanum sleppt á próteinfilmuna Gerðu það "virkjað", skolaðu með biðminni eftir 30 mínútur og það er hægt að setja það beint á.
Föstu og hreinsuðu frumurnar eru gerðar í hæfilegan styrk af frumusviflausn með síuðu vatni undir stafrænni smásjá og sjónsmásjáin er sett á glerglas eða plastplötu sem hefur verið þakið himnu og sett í raka, lága hitastig (40C) umhverfi ( 30-120) mínútur til að leyfa frumunum að festast við himnuna. Notaðu fína pincet til að taka upp glerglasið og hrista það í hreinu tvöföldu eimuðu vatni og þvo í burtu ótengdar frumur með ljóssmásjá. Kröfur um þykkt glæra í ljóssmásjáum Skautunarsmásjár eru síðan settar fljótt í ílát sem er fyllt með 50 prósent asetoni (eða etanóli). Afvötnunarferlið er að setja glærurnar í asetón eða etanól með vaxandi styrk á 3 mínútna fresti, og sjónsmásjá eða stöðugt auka styrk þurrkunarefnisins í glerglasílátinu. Samkvæmt reynslu rannsóknarstofu höfundar er síðarnefnda aðgerðin þægilegri. Sértæka aðferðin við sjónsmásjá getur sogað út helminginn af þurrkunarefninu í ílátinu á 3 mínútna fresti og síðan bætt við jöfnu magni af þurrkunarefni með styrkleika upp á 100 prósent. Eftir 5-6 aðgerðir nær styrkur þurrkunarefnisins í smásjáverðsílátinu yfir 0,5 prósent og frumurnar eru þurrkaðar með góðum árangri. Eftir þurrkun á mikilvægum punkti er glerrennan eða plastplatan lím á sýnisbryggjuna með leiðandi lími fyrir málmhúðun. Það eru líka þægindi til að festa frumur við himnur sem mælt er fyrir um með þriðju aðferðinni. Ljóssmásjá getur hengt frumurnar fastar með lágum styrk glútaraldehýðs á "virkjaða" próteinfilmuna. Sjónsmásjáin krefst þess að þykkt glerglassins sé sett í 10 mínútur og glerrennan eða plastplatan er liggja í bleyti í 2 prósent glútaraldehýði. Eftir 30 mínútur, skolaðu með síuðu tvöföldu eimuðu vatni og þurrkaðu síðan af, þurrkaðu og málmhúðun samkvæmt ofangreindri aðferð.
