Af hverju er stækkun olíulinsunnar meiri en venjulegra hlutlinsunnar?
Ástæður fyrir því að laga þarf bakteríur fyrir litun í örverufræðilegum tilraunum:
1: Drepur frumur, er auðvelt að lita með litarefni.
2: Láttu bakteríurnar festast við glerrennuna og það er ekki auðvelt að skolast í burtu með vatni.
Þegar það er fest skal það þurrkað hægt. Ef þú vilt virkilega flýta þér geturðu þurrkað það nokkrum sinnum í fjarlægð fyrir ofan loga sprittlampans. Ekki láta glerið hitna, annars getur það eyðilagt lífsform baktería.
Gram litun og smásæ athugun á bakteríum
1. Tilraunaregla
Gram litunarregla: Bakteríur bregðast mismunandi við Gram litun vegna samsetningar og uppbyggingu frumuveggja þeirra. Frumuveggur Gram-jákvæðra baktería er aðallega nethnútur sem myndast af peptidoglycan. Þegar það er meðhöndlað með etanóli minnkar svitaholastærð netbyggingarinnar vegna ofþornunar og gegndræpi minnkar þannig að flókið kristalfjólu-joðs Efnið er ekki auðvelt að skola út og halda í frumuna og blá- fjólublái liturinn á aðallitunarefninu er enn haldið eftir aflitun og mótlitun. Peptíðóglýkanlag frumuvegg Gram-neikvædra baktería er þunnt og fituinnihald er hátt, þannig að þegar aflitunarmeðferðin er framkvæmd leysist lípíðið upp með etanóli (eða asetoni) og gegndræpi frumuveggsins eykst, svo að flókið kristalfjólu-joðs Auðveldara er að skola út og eftir mótlitun með mótlitun eru frumurnar litaðar með rauðum lit mótlitunar. Smásjármyndafræðiregla: Nútíma venjuleg sjónsmásjár nota tvö linsukerfi af augngleri og hlutlinsu til að stækka myndina, svo þær eru oft kallaðar samsettar smásjár. Í sjónkerfi smásjáarinnar er frammistaða hlutlinsunnar mikilvægust og stækkun olíulinsunnar er sú stærsta, sem er mikilvægust fyrir örverufræðilegar rannsóknir. Megintilgangur þess að bæta við dýfingarolíu á milli glerrennunnar og linsunnar er að auka birtustig lýsingarinnar og auka upplausn smásjáarinnar. Olía er notuð í stað lofts sem ljósflutningsmiðill til að draga úr ljósbroti eða heildarendurkasti ljóss og gera myndina skýrari.
2. Tilraunabúnaður
1. Nýlendur:
Escherichia coli 24h næringarefna agar skárækt,
Staphylococcus aureus um 24 klst næringaragar hallaræktun, Bacillus subtilis 12-18h næringaragar hallaræktun.
2. Lausnir eða hvarfefni:
Eimað vatn, joðlausn, kristalfjólublátt litunarlausn, 95 prósent alkóhól, safranín litunarlausn, sedrusviðolía. 3. Hljóðfæri:
Smásjá, glerrennibraut, sáningarlykkja, sprittlampi, pincet, linsuvefur.
3. Tilraunaskref
a:
1. Smyrja
Taktu glæruna út, kveiktu í rennibrautinni, brenndu áfengið á rennibrautinni út og sótthreinsaðu það, settu lítinn dropa af eimuðu vatni í miðjuna, notaðu sáningarlykkjuna til að tína varlega lítið magn af bakteríum á hallandi miðil prófsins rör, Meðan á öllu ferlinu stendur ætti munnur tilraunaglassins að vera fyrir ofan áfengislampann og hraðinn ætti að vera mikill til að koma í veg fyrir mengun ræktunarmiðilsins. Smyrðu svo litlu vatnsdropunum á glerglasið í hringlaga hreyfingum, stöðvuðu þegar vatnsdroparnir eru skýjaðir og bíddu eftir að þeir þorna og lagast.
2. Aðal litun
Slepptu kristalfjólu (það er rétt að hylja bakteríufilmuna) á nýlenduna, litaðu í 1-2 mínútur, helltu litunarlausninni af og skolaðu með fínu vatni ofan á rennibrautinni þar til skolvatnið er litlaus, og settu blettinn á rennibrautina. Hristið vatnið af sneiðunum.
3. Mordant
Bætið joðlausninni í dropatali til að skola í burtu leifar af vatni, hyljið í um það bil 1 mín og þvoið með vatni.
4. Aflitun
Hristið vatnið af glerrennibrautinni, hallið glerrennunni og bætið við 95 prósent alkóhóli til að aflita það undir hvítum bakgrunni, þar til útstreymi áfengið virðist bara ekki blátt, skolið áfengið strax með vatni og setjið glerglasið Hristið af vatninu á sneiðunum.
5. Mótlitun
Andlitið með safranínlausn í u.þ.b. 1-2 mínútur, þvoið með vatni og þurrkið síðan þurrt með ísogandi pappír
6. Smásjárskoðun:
Leitaðu að bakteríubyggðinni til að fylgjast með undir linsunni með lítilli stækkun (haltu áfram að hreyfa rennibrautina, ef þú finnur fyrir rauðum skugga skaltu hætta strax, stilla stækkunina, ef það er ekki nýlenda, haltu áfram að finna), lyftu linsuhólknum, og skiptu svo yfir í olíuspegilinn. Bætið dropa af sedrusviðolíu við sýnishornið og lækkið linsuhylkið varlega með grófstillingartækinu þannig að olíulinsan sé sökkt í olíuna og næstum snert sýnishornið. Lyftu eimsvalanum í hæstu stöðu og opnaðu ljósopið að fullu, notaðu grófstillingartækið til að hækka linsuhylkið hægt þar til hlutarmyndin birtist í sjónsviðinu og notaðu fínstillinguna til að gera hana skýra og í fókus.
