Ákvörðun á fjölda örvera - bein talningaraðferð smásjáarinnar!
Bakteríufjölgun kemur fram með aukningu á frumufjölda eða aukningu á frumumassa. Aðferðirnar til að ákvarða fjölda frumna eru meðal annars bein talningaraðferð í smásjá, talningaraðferð á plötunýlendum, aðferð við hlutfall ljósolíu, hámarkslíkindaaðferð og himnusíunaraðferð. Aðferðirnar til að mæla frumuefni fela í sér ákvörðun á þurrþyngd frumunnar, ákvörðun á tilteknum frumuþáttum eins og köfnunarefni, RNA og DNA innihaldi og ákvörðun umbrotsefna. Í stuttu máli eru margar aðferðir til að mæla vöxt örvera, hver með sína kosti og galla og ætti að velja í samræmi við sérstakar aðstæður. Þessi tilraun kynnir aðallega smásjábeina talningaraðferðina sem almennt er notuð í framleiðslu og vísindarannsóknum.
1. Kröfur um tilgang
1. Skýrðu meginregluna um fjölda blóðkorna.
2. Náðu tökum á aðferðinni við að telja örverur með því að nota blóðkornateljara.
2. Grunnreglur
Bein talningaraðferð í smásjá er einföld, fljótleg og leiðandi aðferð til að telja beint lítið magn af sviflausn af sýninu sem á að prófa á sérstöku glerglasi með ákveðnu svæði og rúmmáli (einnig þekktur sem bakteríuteljari). Aðferðir. Sem stendur eru algengustu bakteríuteljararnir heima og erlendis: blóðkornatalningaborð, Peteroff-Hauser bakteríuteljari og Hawksley bakteríuteljari o.s.frv. Hægt er að nota þá til að telja ger, bakteríur, myglugró og aðrar sviflausnir, og grundvallarreglan er sú sama. Síðarnefndu tvær tegundir bakteríuteljara hafa heildarrúmmál 0.02 mm3 eftir að hafa verið þakið hlífðargleri og fjarlægðin milli hlífðarglersins og rennibrautarinnar er aðeins 0,02 mm, þannig að olían Hægt er að nota dýfingarlinsu til að fylgjast með og fylgjast með litlum frumum eins og bakteríum. telja. Auk þessara bakteríumæla er einnig til matsaðferð fyrir hlutfall svæðis stroksins og flatarmáls sjónsviðsins sem sést beint undir smásjá, sem almennt er notuð við bakteríurannsókn á mjólk. Kostir beinni talningaraðferðar smásjár eru leiðandi, fljótleg og auðveld í notkun. Hins vegar er ókosturinn við þessa aðferð að mæld niðurstaða er yfirleitt summa dauðra og lifandi frumna. Eins og er, eru nokkrar aðferðir til að vinna bug á þessum annmarka, svo sem samsetning lífvænlegra baktería sem litar örhólfaræktun (skammur tími) og viðbót við frumuskiptingarhemla til að ná þeim tilgangi að telja aðeins lífvænlegar bakteríur.
Í þessari tilraun var blóðfrumnamælir notaður sem dæmi fyrir beina smásjátalningu. Fyrir notkun á hinum tveimur gerðum bakteríuteljara, vinsamlegast skoðið leiðbeiningar hvers framleiðanda. Talning beint undir smásjá með blóðfrumnamæli er algeng aðferð til að telja örverur. Talningarplatan er sérstök glerrennibraut, þar sem þrír pallar eru myndaðir af fjórum raufum; breiðari pallurinn í miðjunni skiptist í tvo helminga með stuttri þverrauf og er rist á hvorri hlið pallsins. Hverri rist er skipt í níu stóra ferninga og stóri ferningurinn í miðjunni er talningarherbergið. Uppbygging blóðkornatalningarplötunnar er sýnd á mynd l{{{{10}}}}. Mælikvarði talningarherbergisins hefur yfirleitt tvær forskriftir, annar er stór ferningur sem er skipt í 25 miðreit og hverjum miðreit er skipt í 16 litla ferninga (Mynd 15-2); hitt er stórt torg. Ferningnum er skipt í 16 miðreit og hverjum miðreit er skipt í 25 litla ferninga, en sama hvers konar talningartöflu það er, þá eru 400 litlir ferningar í hverjum stórum ferningi. Hliðarlengd hvers stórs fernings er 1 mm og flatarmál hvers stórs fernings er 1 mm2. Eftir þekju með hlífðargleri er hæðin milli hlífðarglers og glerglers 0,1 mm, þannig að rúmmál talningarhólfsins er 0,1 mm3 (einn þúsundasti úr millilítra). Mynd 15-1 Uppbygging blóðkornatalningartöflunnar (1) Mynd 15-2 Uppbygging blóðkornatalningartöflunnar (2) A. Framsýn; B. Lengdarsniðssýn; Stækkað rist, stóri ferningurinn í miðjunni er talningarhólfið 1. Blóðfrumur Talningarplata; 2. Hlífðargler; 3. Þegar talið er í talningarklefanum, teljið venjulega heildarfjölda baktería í fimm ferningum, reiknið síðan meðaltal hvers fernings og margfaldið með 25 eða 16 til að fá Heildarfjölda baktería í stórum ferningi er síðan umreiknaður í heildarfjöldi baktería í 1 ml af bakteríulausn. Láttu heildarfjölda baktería í ferningunum fimm vera A og þynningarhlutfall bakteríulausnarinnar vera B. Ef það er talningarplata með 25 ferningum, heildarfjöldi baktería í 1 ml af bakteríulausn {{26} } A/5×25×104× B=50000A·B(stykki) Á sama hátt, ef það er talningarplata með 16 meðalstórum ferningum, heildarfjöldi baktería í 1mL bakteríulausn=A/ 5×16×104×B=32000A·B (stykki)
3. Búnaður
1. Bakteríur
Saccharomyces cerevisiae
2. Hljóðfæri eða önnur áhöld
Blóðkornamælir, smásjá, hyljari, dauðhreinsaður háræðadropari.
4. Aðgerðarskref
1. Undirbúningur bakteríusviflausnar
Saccharomyces cerevisiae var útbúin í bakteríusviflausn með viðeigandi styrk með dauðhreinsuðu lífeðlisfræðilegu saltvatni.
2. Talningarherbergi fyrir smásjá
Áður en sýnum er bætt við skal skoða talningarhólf talningarplötunnar með smásjá. Ef það er óhreinindi þarf að þrífa það og þurrka það áður en talið er.
3. Bættu við sýni
Hyljið hreina og þurra blóðfrumnamælirinn með hyljara og notaðu síðan sæfðan háræðadropa til að sleppa litlum dropa af hristri Saccharomyces cerevisiae sviflausn frá brún hyljarans og láta bakteríulausnina sjálfkrafa hreyfast eftir bilinu með háræðasflæði. Þegar farið er inn í talningarherbergið er hægt að fylla almenna talningarherbergið með bakteríuvökva. Við sýnatöku skal fyrst hrista bakteríulausnina; þegar sýnum er bætt við ættu engar loftbólur að myndast í talningarhólfinu.
4. Smásjátalning
Eftir að sýninu hefur verið bætt við skaltu standa kyrr í 5 mínútur, setja blóðkornamælirinn á smásjárstigið, fyrst finna staðsetningu talningarhólfsins með lítilli afl smásjá og síðan skipt yfir í stóra smásjá til að telja. Stilltu styrk smásjárljóssins á viðeigandi hátt. Gætið þess að víkja ekki frá annarri hlið ljóssins fyrir smásjár sem nota spegla til að lýsa því annars verður ekki auðvelt að sjá ferningslínur talningarstofunnar greinilega í sjónsviðinu, eða aðeins lóðréttar línur eða láréttar línur sjást. Ef í ljós kemur að bakteríulausnin er of þétt eða of þynnt fyrir talningu er nauðsynlegt að endurstilla þynninguna áður en talið er. Almennt þarf sýnisþynningin um það bil 5 til 10 bakteríur í hverri litlu frumu. Hvert talningarhólf velur 5 miðhólfa (valfrjálst 4 horn og einn miðhólfi í miðju) til að telja. Hólf sem staðsett eru á ristlínunni eru almennt aðeins talin á efri og hægri línunni. Þegar um er að ræða gerbrjóst, þegar stærð brumsins nær helmingi móðurfrumunnar, er hann talinn sem tvær bakteríufrumur. Til að telja sýni, reiknaðu bakteríuinnihald sýnisins með því að reikna út meðalgildi úr talningarhólfunum tveimur.
5. Þvoðu blóðkornafjöldann
Eftir notkun skal skola blóðkornatalningartöfluna með vatni í krananum, ekki skrúbba með hörðum hlutum og þurrka það sjálfur eða með hárþurrku eftir þvott. Smásjárskoðun til að athuga hvort það séu bakteríuleifar eða önnur setlög í hverri litlu frumu. Ef það er ekki hreint þarf að þvo það ítrekað þar til það er hreint.
