Ákvörðun á fjölda örvera - Örsjárfræðileg bein talningaraðferð!
Bakteríufjölgun kemur fram með aukningu á frumufjölda eða aukningu á frumuefni. Aðferðir til að ákvarða fjölda frumna eru meðal annars bein smásjátalning, plötutalning, gruggmat með litrófsmæli, líklegasta fjölda MPN og himnusíun. (himnusíun) o.s.frv. Aðferðir til að mæla frumuefni eru meðal annars ákvörðun á þurrþyngd frumna, ákvörðun á tilteknum frumuþáttum eins og köfnunarefnisinnihaldi, RNA og DNA innihaldi og ákvörðun umbrotsefna. Í stuttu máli eru margar aðferðir til að mæla örveruvöxt, hver með sína kosti og galla. Aðferðin ætti að vera valin í samræmi við sérstakar kröfur verksins. Þessi tilraun kynnir aðallega smásjábeina talningaraðferðina sem er almennt notuð í framleiðslu og vísindarannsóknum.
1. Kröfur um tilgang
1. Skýrðu meginregluna um talningu með blóðkornatalningartöflu.
2. Náðu tökum á aðferðinni við að telja örverur með því að nota blóðkornatalningartöflu.
2. Grunnreglur
Bein talningaraðferð í smásjá er einföld, fljótleg og leiðandi aðferð sem setur lítið magn af sviflausn af sýninu sem á að prófa á sérstaka glæru með ákveðnu svæði og rúmmáli (einnig kallaður bakteríumælir) og telur það beint undir smásjá. Aðferðir. Sem stendur eru algengir bakteríumælar heima og erlendis meðal annars: blóðfrumnamælir, Peteroff-Hauser bakteríumælir og Hawksley bakteríumælir o.s.frv. Þeir geta allir verið notaðir til að telja ger, bakteríur, myglugró og aðrar sviflausnir, og grundvallarreglurnar eru þær sömu. Síðarnefndu tveir bakteríuteljararnir hafa heildarrúmmálið 0.02mm3 eftir að hafa verið þakið hlífðargleri og fjarlægðin milli hlífðarglersins og rennibrautarinnar er aðeins 0,02 mm. Þess vegna er hægt að nota olíudýfingarlinsu til að fylgjast með og greina smærri frumur eins og bakteríur. telja. Auk þess að nota þessa bakteríumæla er einnig til matsaðferð sem athugar beint hlutfall strokflatar og sjónsviðssvæðis í smásjá. Þessi aðferð er almennt notuð við bakteríurannsókn á mjólk. Kostir smásjárbeina talningaraðferðarinnar eru að hún er leiðandi, fljótleg og auðveld í notkun. Hins vegar er ókosturinn við þessa aðferð að mæld niðurstaða er yfirleitt summan af dauðum bakteríum og lifandi bakteríum. Eins og er eru nokkrar aðferðir til að vinna bug á þessum annmarka, svo sem að sameina lífvænlegar bakteríur sem lita örhólfaræktun (skammur tími) og bæta við frumuskiptahemlum til að ná þeim tilgangi að telja aðeins lífvænlegar bakteríur.
Þessi tilraun notar blóðkornamæli sem dæmi til að framkvæma beina talningu undir smásjá. Um notkun hinna tveggja bakteríumælanna, vinsamlegast skoðið leiðbeiningar hvers framleiðanda. Bein talning undir smásjá með því að nota blóðfrumnamæli er almennt notuð örveruupptalningaraðferð. Talningarborðið er sérstök rennibraut með fjórum rifum sem mynda þrjá palla; breiðari pallurinn í miðjunni er skipt í tvo helminga með stuttri láréttri gróp og rist er rist á hvorri hlið pallsins. Hvert ferningsnet skiptist í níu stóra ferninga og stóri ferningurinn í miðjunni er talningarsalurinn. Uppbygging blóðkornatalningartöflunnar er sýnd á mynd {{0}}. Það eru almennt tvær forskriftir fyrir mælikvarða talningarhólfsins. Einn er stór ferningur sem er skipt í 25 miðlungs ferninga, og hverjum miðlungs ferningi er skipt í 16 litla ferninga (Mynd 15-2); hitt er stórt torg. Ferningsnetinu er skipt í 16 meðalstóra ferninga og hverjum miðlungs ferningi er skipt í 25 litla ferninga. Hins vegar, sama hvers konar talningartöflu það er, þá eru 400 litlir ferningar í hverjum stórum ferningi. Hliðarlengd hvers stórs fernings er lmm, þá er flatarmál hvers stórs fernings lmm2. Eftir að þekjumiðinn er þakinn er hæðin á milli þekjublaðsins og rennunnar 0,lmm, þannig að rúmmál talningarhólfsins er 0,lmm3 (einn tíu þúsundasti úr millilítra). Mynd 15-1 Uppbygging blóðkornatalningartöflu (1) Mynd 15-2 Uppbygging blóðkornatalningartöflu (2) A. Framsýn; B. Lengdarsnið; stækkað ferningsnet, stóri ferningurinn í miðjunni er talningarhólfið 1. Blóðfrumur Talningarborð; 2. Hlífðarmiði; 3. Þegar talið er í talningarklefanum, teljið venjulega heildarfjölda baktería í fimm ferningum, finnið síðan meðalgildi hvers fernings og margfaldar síðan með 25 eða 16 til að fá Heildarfjölda baktería í stórum ferningi er síðan umreiknaður inn í heildarfjölda baktería í 1 ml af bakteríulausn. Segjum sem svo að heildarfjöldi baktería í miðju ferningunum fimm sé A og þynningarstuðull bakteríulausnarinnar er B. Ef það er talningarplata með 25 miðferningum þá er heildarfjöldi baktería í 1mL af bakteríulausninni {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (stykki) Á sama hátt, ef það er talningarplata með 16 ferningum, heildarfjöldi baktería í 1mL af bakteríulausn {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (stykki),,
