Hvernig geturðu valið réttu confocal smásjána fyrir þig? Er einhver sérstök aðferð?
Confocal smásjárskoðun hefur fleiri kosti en breiðsvið smásjárskoðun. Confocal smásjárskoðun getur gert samfellda sjónræna sneiðmynd af sýnum og útilokað truflun merkja frá fókusplanum. Af þessum sökum er notkun confocal smásjárskoðunar örugglega algengari. Hins vegar eru fleiri og fleiri confocal smásjár á markaðnum. Hvernig á að velja?
Confocal smásjárskoðun hefur fleiri kosti en breiðsvið smásjárskoðun. Confocal smásjárskoðun getur gert samfellda optíska hluta af sýnum og útilokað truflun á merkjum frá ekki brennivítum. Af þessum sökum er confocal smásjárskoðun örugglega algengari. Hins vegar eru fleiri og fleiri confocal smásjár á markaðnum. Hvernig á að velja? Þegar þú velur confocal smásjá er tvennt grundvallaratriði og mikilvægt að huga að: tegund sýnis sem þú vilt rannsaka (td fastar eða lifandi frumur), og tegund greiningar sem þú vilt framkvæma (td kyrrstöðu eða kvik frumuferli).
Confocal myndgreining á föstum frumum
Til að mynda fastar og litaðar frumur eða vefi veljum við almennt laserskönnun confocal (LSCM). Þetta er aðallega vegna þess að fastar dauðar frumur skortir hraðvirka líffræðilega atburði í lifandi frumum og geta betur notið góðs af hærri staðbundinni upplausn LSCM. LSCM myndgreining er að sneiða sýnishornið með leysir og skannahraði (fer eftir hraða skönnunarflokksspegilsins) er yfirleitt 1fps. Lengri lýsingartími þýðir meiri hættu á ljósbleikingu, en fyrir fastar dauðar frumur er tíminn ekki mikilvægur og við getum meðaltalið út með því að taka margar myndir.
Confocal myndgreining af lifandi frumum
Myndgreining á lifandi frumum krefst viðbótarverndar gegn óvingjarnlegu umhverfi. Við myndgreiningu er fyrsta íhugun okkar að viðhalda frumulífi og heilsu. Stöðugt hitastig hitaeiningar og gegnflæðiskerfi eru nauðsynleg, sérstaklega fyrir tíma-lapse rannsóknir. Hinir hröðu lífefnafræðilegu atburðir sem stjórna lífeðlisfræðilegu ástandi lifandi frumna eru það sem flestir vilja rannsaka, en þessir atburðir eru of hraðir fyrir hefðbundna LSCM. Að auki olli langvarandi útsetning fyrir LSCM einnig eitrað ljósskemmdum á frumum. Þess vegna krefst myndgreiningar á lifandi frumum sérstakrar confocal smásjár.
Það eru almennt tveir valkostir fyrir confocal myndgreiningu af lifandi frumum: hraðskönnun leysir skönnun confocals og snúning disk confocals. Hraðskönnun confocal smásjárskoðun kemur í stað hægari galvanometerspegla fyrir hraðari endurómskönnunarspegla, sem gerir skönnunarhraða allt að 30fps; á meðan snúningsdiskar (SDCMs) hafa þann kost að skanna hraðar (þó óhjákvæmilega með tapi í rúmupplausn), getur hraði hans fræðilega náð 2000fps (í reynd er hann oft takmarkaður af öðrum þáttum).
Ef þú hefur áhyggjur af ljósbleikju eða mjög veikum flúrljómunarmerki, þá gæti SDCM hentað betur. SDCM notar tvo snúningsdiska með örbrunnum í röð til að dreifa örvunarljósinu. Ólíkt LSCM, sem skannar sýnishornið, fær SDCM marga bletti í einu (um 100 pixla bletti), þannig að hraðinn eykst til muna, og ljósbleiking SDCM og minni ljóseiturhrif. Hins vegar er líka hægt að nota hraðskannanir til að auka skönnunarhraða, ásamt mjög viðkvæmum skynjara, og draga úr örvunarljósorku til að draga úr ljóseiturhrifum, sem getur viðhaldið ríkulegum virkni hefðbundinna samfókusa.
Sjálfvirkt confocal myndgreiningarkerfi
Sumir vísindamenn vilja finna leiðir til að breyta smásjánni til að henta þörfum hvers og eins. Og sumir vísindamenn hafa ekki einu sinni áhuga á því hvernig smásjár virka í raun. Fyrir hið síðarnefnda gæti sjálfvirk confocal smásjá verið þeim meira að skapi. Til dæmis er Olympus FluoViewFV10i svona fullsjálfvirk skrifborðs-4-leysissmásjá. Samþætt samþætt uppbygging þess krefst nánast ekkert uppsetningarpláss. Þessi tegund af tækjum er tilvalin fyrir rannsakendur sem þurfa að gera mikið af myndgagnaöflun á hverjum degi, en auðvitað endurspegla þau ekki að fullu virkni og sveigjanleika hefðbundinna samfókusa. Að auki er NikonA1 einnig fullsjálfvirkt confocal kerfi. Eins og flestar hefðbundnar confocal skanna smásjár, notar NikonA1 galvanometer skannahaus, sem hefur hærri upplausn en A1R með blendingshöfuði, en aðeins hægari hraða (A1R ~30fps)
