Hvernig sést formgerð örverufrumna í smásjá?
Smásjár voru fundnar upp til að sjá brosandi hluti sem ekki er hægt að sjá með berum augum. Örverur eru mjög litlar og því þarf að stækka þær og fylgjast með þeim með hjálp smásjár. Að auki eru til margar tegundir af örverum, þannig að í grundvallaratriðum geta flestar sjónsmásjár fylgst með örverum. Næsta spurning er hvaða tegund af smásjá á að nota við athugun og greiningu á hvers konar örverum. Algengar smásjár sem hægt er að nota til að fylgjast með formgerð örvera eru líffræðilegar smásjár, fasasmásjár, öfugar smásjár, flúrljómunarsmásjár, confocal smásjár osfrv.
Eftirfarandi lýsir hinum ýmsu smásjám sem notuð eru til að fylgjast með örverum:
1. Venjuleg sjónsmásjá notar náttúrulegt ljós eða ljós sem ljósgjafa og er bylgjulengd hennar um 0,4 μm. Upplausn smásjáarinnar er helmingur af bylgjulengdinni, það er 0,2 μm, og minnsta myndin sem sést með berum augum er 0,2 mm. Þess vegna getur það stækkað 0,2μm agnirnar í 0,2mm sem sjást með berum augum með því að nota olíuspegil (dýfingarspegil) til að stækka 1000 sinnum. Hægt er að nota venjulegar sjónsmásjár til að fylgjast með bakteríum, bakteríum og sveppum.
2. Darkfield smásjárskoðun er almennt notuð til að fylgjast með formgerð og hreyfingu ólitaðra örvera. Eftir að dökksviðsþéttirinn er settur upp í venjulegri smásjá getur ljósið ekki farið beint frá miðjunni og sjónsviðið er dökkt. Þegar sýnishornið fær skáljóst frá brún eimsvalans getur það dreift sér, þannig að hægt er að sjá bjartar örverur eins og bakteríur eða spírókettur í dökkum bakgrunni.
3. Fasa andstæða smásjá Fasa andstæða smásjá notar ljósáhrif fasa mismunaplötunnar til að breyta ljósfasa og amplitude beins ljóss og umbreyta mismun ljósfasa í ljósstyrksmun. Undir fasa-andstæða smásjá, þegar ljós fer í gegnum ólitað sýni, stafar munurinn á ljósfasa af ósamræmi í þéttleika mismunandi hluta sýnisins og hægt er að sjá formgerð, innri uppbyggingu og hreyfiham örvera.
4. Flúrljómunarsmásjá Flúrljómunarsmásjá er í grundvallaratriðum það sama og venjuleg sjónsmásjá, aðalmunurinn er ljósgjafinn, sían og eimsvalinn. Sem stendur nota flestir þeirra epi-ljós tæki og háþrýsti kvikasilfurslampar eru almennt notaðir sem ljósgjafar sem geta gefið frá sér útfjólubláu eða bláfjólubláu ljósi. Það eru tvær tegundir af síum: örvunarsíu og frásogssíu. Auk almennra bjartsviðsþétta er einnig hægt að nota dökksviðsþéttara í flúrljómunarsmásjám sem nota blátt ljós til að auka andstæðan milli flúrljómunar og bakgrunns. Þessi aðferð á við til að greina eða bera kennsl á bakteríur litaðar með flúrljómandi litarefnum eða samsettar með flúrljómandi mótefnum.
5. Rafeindasmásjár nota rafeindaflæði sem ljósgjafa og er bylgjulengdin tugþúsundfalda frá sýnilegu ljósi sem bætir upplausnina til muna. Það notar einnig segulspólu sem sjónmögnunarkerfi og stækkunin getur náð tugþúsundum eða hundruð þúsunda sinnum. Það er oft notað til að fylgjast með vírusögnum og uppbyggingu baktería.
Athugun á ólituðum örverusýnum:
Almennt er hægt að nota ólituð sýni til að fylgjast með formgerð, krafti og hreyfingu baktería. Bakteríur eru litlausar og gagnsæjar þegar þær eru ólitaðar og sjást í smásjá aðallega af mismun á brotstuðul baktería og umhverfisins í kring. Bakteríur með flagella hreyfast kröftuglega á meðan bakteríur án flagella sýna óreglulega Brownian hreyfingu. Lífvænlegar bakteríur eins og Treponema pallidum, Leptospira og Campylobacter hafa sérstakt form og hreyfimynstur sem hafa greiningarmikilvægi. Algengar aðferðir eru þrýstingsfallsaðferð, pendant drop aðferð og háræðaaðferð.
1. Berið vaselín í kringum íhvolfa gatið á hreina íhvolfa glerinu með hangandi dropaaðferð, notaðu sáningarlykkju til að taka hring af bakteríusviflausn og settu hann í miðju hlífðarglersins, stilltu síðan íhvolfa gatið á íhvolfa glerinu með dropinn í miðju hlífðarglersins og hyljið það, snúið henni svo snöggt við, þrýstið létt á hlífðarglerið til að það festist þétt við vaselínið á brún íhvolfa gatsins og athugaðu undir stórstækkunarsmásjá (eða dökkt svið).
2. Taktu hring af bakteríusviflausn með sáningarlykkju og settu hann í miðjuna á hreinni glerrennibraut með þrýstifallsaðferð og hyldu bakteríusviflausnina varlega með hlífðargleri og gætið þess að forðast loftbólur og flæði úr bakteríusviflausninni. . Eftir að hafa staðið kyrr í nokkrar sekúndur, athugaðu undir öflugri smásjá á björtu sviði (eða dökku sviði).
3. Háræðaaðferðin er aðallega notuð til að kanna hreyfihvörf loftfirrtra baktería. Veldu venjulega 60~70mm langa. Eftir að sviflausn loftfirrtra bakteríanna hefur verið dregin í gegnum háræð með 0,5-1,0 mm opi, lokaðu tveimur endum háræðsins með loga. Háræðið var fest á glerglasið með plastpappír og skoðað undir sterkri linsu í myrku sviði.
Athugun á lituðum örverusýnum með smásjá:
Eftir að bakteríusýnin hafa verið lituð, vegna mikillar andstæðu í lit á milli bakteríanna og umhverfisins í kring, eru formfræðilegir eiginleikar bakteríanna (svo sem stærð, lögun, fyrirkomulag osfrv.) bakteríanna og sumra sérstakra mannvirkja (s.s.frv.) eins og hylki, flagellur, gró o.s.frv.) er hægt að sjá greinilega undir venjulegri sjónsmásjá og hægt er að flokka og greina bakteríurnar í samræmi við litunarviðbragðið.
(1) Almenn aðferð við bakteríulitun Almenn aðferð við bakteríulitun er: strok (þurrkun) - festing - litun.
1. Strok Undirbúningur á blóði, seyti, útskilnaði, stunguvökva og vökvaræktun, og bein þunnfilmustrok á glerglas; krufningu eða sýktum dýravef, strjúka meininu með bómullarþurrku til sýnatöku. Til að búa til bakteríuþyrpingar eða grasflöt á föstu efni, notaðu fyrst sáningarlykkju til að taka hring af venjulegu saltvatni og setja hann í miðju glerglassins, notaðu síðan dauðhreinsaða sáningarlykkju til að taka lítið magn af ræktun og mala það jafnt í venjulegu saltvatni, dreift því á 1cm2 húðað yfirborð og látið það þorna náttúrulega við stofuhita eða þorna hægt í fjarlægð.
2. Tilgangur festingar er að drepa bakteríur, storkna bakteríuprótein og uppbyggingu og auðvelda litun; stuðla að því að bakteríur festist við rennibrautina til að forðast að skolast í burtu með vatni meðan á þvotti stendur; breyta gegndræpi baktería í litarefni, sem er gagnlegt fyrir litun á innanfrumugerð baktería. Það er venjulega fest með því að hita með loga og þurrkað strok er fljótt farið í gegnum logann í 3 sinnum. Það er betra að brenna ekki húðina á handarbakinu þegar hún snertir rennibrautina.
3. Litun Samkvæmt mismunandi skoðunartilgangi, veldu mismunandi litunaraðferðir til litunar. Þegar litað er skaltu bæta litarlausninni í dropatali til að auka þekjuna.
4. Mordant Sérhvert efni sem getur aukið sæknin milli litarefnisins og litaðs hlutarins, fest litarefnið á litaða hlutinn og valdið breytingu á gegndræpi frumuhimnunnar kallast beitingarefni. Algengt er að nota ál, tannínsýra, málmsölt og joð osfrv., og hitun er einnig notuð til að stuðla að litun. Hægt er að nota blettur á milli frumlitunar og mótlitunar og einnig er hægt að nota eftir festingu eða innihalda festingarefni og litun.
5. Aflitun Sérhver efnafræðileg efni sem getur fjarlægt lit litaða hlutarins er kallað aflitunarefni. Etanól, asetón o.s.frv. er almennt notað sem litaefni. Aflitunarefnið getur greint stöðugleika samsetningar baktería og litarefna, sem hægt er að nota til mismunandi litunar.
6. Mótlitunarbakteríur eða byggingar þeirra sem hafa verið aflitaðar eru oft mótlitaðar með mótlitunarlausn til að auðvelda athugun. Liturinn á mótlitunarlausninni er frábrugðinn litarlausninni til að mynda skarpa andstæðu. Mótlitunin ætti ekki að vera of sterk, til að hylja ekki litinn á upphafslituninni.
