Undirbúningur og athugun á lífsýnum fyrir rafeindasmásjárskoðun
Upplausn smásjár fer eftir bylgjulengd ljóssins sem notað er. Rafeindasmásjáin, sem byrjaði að koma fram árið 1933, notar rafeindageisla með mun styttri bylgjulengd en sýnilegs ljóss sem ljósgjafa, þannig að upplausnin sem hún getur náð er stórbætt miðað við ljóssmásjá. Munurinn á ljósgjafa ákvarðar einnig röð mismuna milli rafeindasmásjáa og sjónsmásjáa.
Samkvæmt muninum á meginreglum rafeindageislamyndagerðar og mismunandi verkunaraðferðum á sýni, hafa nútíma rafeindasmásjár þróast í margar tegundir. Eins og er eru þær sem oftast eru notaðar sendingarrafeindasmásjár og skanna rafeindasmásjár. Heildarstækkun þess fyrrnefnda getur verið á milli 1000-1000000. Heildarstækkun þess síðarnefnda getur verið breytileg á milli 20 og 300,000 sinnum. Þessi tilraun kynnir aðallega framleiðslu á tvenns konar smásjásýnum, sendingarrafeindasmásjá og skanna rafeindasmásjá.
2. Búnaður
1. Bakteríur Escherichia coli (Escherichia coli) hallandi.
2. Lausn eða hvarfefni amýlasetat, óblandaðri brennisteinssýra, algert etanól, dauðhreinsað vatn, 2% natríumfosfówolframat (pH 6.5-8.0) vatnslausn, 0,3% pólýetýlen formaldehýð (leysanlegt í klóróformi) lausn, frumur Litarefni c, ammoníum asetat, plasmíð pBR322.
3. Hljóðfæri eða önnur áhöld: Venjuleg sjónsmásjá, koparnet, postulínstrekt, bikarglas, fat, dauðhreinsað dropatæki, dauðhreinsað pincet, pinnar, rennibrautir, talningarbretti, lofttæmihúðunarvél, þurrkari fyrir mikilvæga punkta osfrv.
3. Aðgerðaskref
(1) Sýnagerð og athugun fyrir rafeindasmásjárskoðun
1. Meðferð á málmneti
Sýnið fyrir sjónsmásjárskoðun er sett á glæru til athugunar. Hins vegar, í sendingarrafeindasmásjárskoðun, þar sem rafeindir geta ekki komist í gegnum glerplötuna, er möskvaefni aðeins hægt að nota sem burðarefni, venjulega kölluð burðarnet. Hægt er að skipta burðarnetinu í margar mismunandi forskriftir vegna mismunandi efna og forma, þar á meðal er algengast að nota 200-400 möskva (fjöldi hola) koparnet. Koparnetið verður að meðhöndla fyrir notkun til að fjarlægja óhreinindi og halda því hreinu, annars mun það hafa áhrif á gæði stuðningsfilmunnar og skýrleika sýnismyndanna. Þessi tilraun notar koparnet úr 400-mesh sem hægt er að meðhöndla á eftirfarandi hátt: Leggið það fyrst í bleyti og bleikið það með amýlasetati í nokkrar klukkustundir, skolið það síðan nokkrum sinnum með eimuðu vatni og drekkið það síðan í algeru etanóli í ofþornun. Ef koparnetið er enn ekki hreint eftir ofangreindar aðferðir, getur þú bleytt það í þynntri óblandaðri brennisteinssýru (1:1) í 1 til 2 mínútur, eða sjóðað það í 1% NaOH lausn í nokkrar mínútur, skolað það með eimuðu vatn nokkrum sinnum, og settu það síðan í vatnsfrí Dehydrate í etanóli og settu til hliðar.
2. Undirbúningur stuðningshimnu
Þegar sýni eru skoðuð ætti burðarnetið einnig að vera þakið lagi af ómótaðri, einsleitri filmu, annars leka lítil sýni úr holum burðarnetsins. Þessi kvikmynd er venjulega kölluð stuðningsmynd eða burðarfilm. Stuðningsfilman ætti að vera rafeinda gagnsæ og þykktin ætti almennt að vera minni en 20nm; undir áhrifum rafeindageislans ætti kvikmyndin einnig að hafa ákveðinn vélrænan styrk til að viðhalda stöðugleika í uppbyggingu og hafa góða hitaleiðni; að auki ætti að nota stuðningsnetið í rafeindasmásjárskoðun. Engin sýnileg uppbygging ætti að vera undir, engin efnahvörf við sýnið sem er borið og engin truflun á athugun á sýninu. Þykkt þess er yfirleitt um 15nm. Stuðningsfilman getur verið plastfilma (eins og kollódíumfilma, pólýetýlenformaldehýðfilma osfrv.), Kolefnisfilma eða málmfilma (eins og berylliumfilma osfrv.). Við venjulegar vinnuaðstæður getur plastfilmur uppfyllt kröfurnar. Meðal plastfilma er tiltölulega auðvelt að útbúa collodion filmu, en styrkur hennar er ekki eins góður og pólýetýlen formaldehýð filma.
