Undirbúningur og athugun á lífsýnum fyrir rafeindasmásjárskoðun
Upplausn smásjáarinnar fer eftir bylgjulengd ljóssins sem notað er, rafeindasmásjáin byrjaði að koma fram árið 1933 er vegna notkunar á mun styttri bylgjulengd en sýnilegt ljós rafeindageislans sem ljósgjafa, þannig að upplausnin það getur náð en sjón smásjá stórlega bætt. Mismunandi ljósgjafinn ákvarðar einnig röð mismuna á rafeindasmásjánni og ljóssmásjánni.
Samkvæmt muninum á myndgreiningarreglu rafeindageislans og hlutverki sýnisins á mismunandi leiðum, hefur nútíma rafeindasmásjáin verið þróuð til að mynda fjölda tegunda, eins og er * almennt notað er sending rafeindasmásjá og skanna rafeind smásjá, fyrrnefnda getur verið á bilinu 1,000-1,000,000 sinnum heildarstækkun breytingasviðsins, hið síðarnefnda getur verið í heildarstækkun á { {4}},000 sinnum heildarstækkun breytinganna á milli. Í þessari tilraun er lögð áhersla á undirbúning sýna fyrir tvær tegundir smásjár, rafeindasmásjár og skanna rafeindasmásjár.
Efni
1. Stofn Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) hallandi.
2. Lausnir eða hvarfefni Amýlasetat, óblandaðri brennisteinssýra, vatnsfrítt etanól, dauðhreinsað vatn, 2% natríumfosfówolframsýra (pH 6.5-8.0) vatnslausn, 0,3% pólývínýl formaldehýð (leyst upp í tríklórmetani) lausn, cýtókróm c, ammóníum asetat, plasmíð pBR322.
3. Hljóðfæri eða önnur áhöld Venjuleg sjónsmásjá, koparnet, postulínstrekt, bikarglas, flatt fat, dauðhreinsað búretta, dauðhreinsað pincet, lansett, skyggnur, ** talningarplata, lofttæmihúðari, þurrkari með mikilvægum punktum og svo framvegis.
Aðgerðarskref
(I) Sýnagerð og athugun á rafeindasmásjá
1. Meðferð á málmneti
Sýni til ljóssmásjár eru sett á glærur til athugunar. Hins vegar, í sendingarrafeindasmásjárskoðun, þar sem rafeindir geta ekki komist í gegnum glerplötuna, er aðeins hægt að nota möskvaefni sem burðarefni, venjulega kallað burðarnet. Hægt er að skipta burðarnetinu í margar mismunandi forskriftir vegna mismunandi efna og forma, þar af * sem almennt er notað er koparnetið 200-400 (fjöldi hola). Koparnet ætti að meðhöndla fyrir notkun til að fjarlægja óhreinindi á því og halda því hreinu, annars mun það hafa áhrif á gæði stuðningsfilmunnar og skýrleika sýnismyndanna. Koparnetið sem notað er í þessari tilraun er 400 möskva, sem hægt er að meðhöndla á eftirfarandi hátt: Í fyrsta lagi, bleikið það með amýlasetati í nokkrar klukkustundir, skolið það síðan með eimuðu vatni nokkrum sinnum og bleikið það síðan í vatnsfríu etanóli í ofþornun. Ef koparnetið með ofangreindri aðferð er enn ekki hreint, má nota til að þynna óblandaða brennisteinssýru (1:1) sökkt í 1 ~ 2 mínútur, eða í 1% NaOH lausn soðin í nokkrar mínútur, skolað nokkrum sinnum með eimuðu vatni , sett í vatnsfrí etanólþurrkun, til að nota.
2. Gerð stuðningsmyndar
Í sýnisathuguninni, í burðarnetinu ætti einnig að vera þakið lag af ómótaðri, samræmdu filmu, annars munu lítil sýni leka út úr holunum í burðarnetinu, þetta lag af filmu er venjulega kallað stuðningsfilman eða burðarfilman. Stuðningsfilman ætti að vera gagnsæ fyrir rafeindum og þykkt hennar ætti almennt að vera minni en 20nm; undir áhrifum rafeindageislans ætti kvikmyndin einnig að hafa ákveðna vélrænan styrk, geta viðhaldið stöðugleika uppbyggingarinnar og hefur góða hitaleiðni; að auki ætti stuðningsnetið ekki að hafa neina sýnilega uppbyggingu undir rafeindasmásjánni og hefur ekki efnahvörf við sýnið sem er flutt og truflar ekki athugun sýnisins og þykkt þess er almennt um 15nm. Stuðningsfilman getur verið úr plastfilmu (td eldbómullarfilmu, pólýetýlenformaldehýðfilmu osfrv.), kolefnisfilmu eða málmfilmu (td berylliumfilmu osfrv.). Við venjulega vinnuaðstæður er hægt að uppfylla kröfurnar með plastfilmu, en undirbúningur plastfilmunnar í eldbómullarlímfilmunni er tiltölulega auðveld, en styrkurinn er ekki eins sterkur og pólýetýlenformaldehýðfilma.
