Litunartækni og smásjárskoðun á örverum
Einföld litun á bakteríum
1 Markmið
1.1 Að læra grunntækni við örverustrok og litun.
1.2 Að ná tökum á einföldu litunaraðferðinni á bakteríum.
1.3 Að kynnast formfræðilegum eiginleikum baktería og treysta lærdóminn á notkun olíuspegla og smitgátaraðferða.
2 Meginregla Strok og litun baktería er grunntækni í örverufræðitilraunum. Frumur baktería eru litlar og gagnsæjar, ekki auðvelt að þekkja þær undir venjulegri ljóssmásjá og þær verða að vera litaðar. Notkun eins litarefnis til að lita bakteríurnar, þannig að lituð lífvera og bakgrunnur myndar skýran litamun, þannig að hægt sé að sjá skýrari formgerð þeirra og uppbyggingu. Þessi aðferð er auðveld í framkvæmd og hentar vel til að fylgjast með almennri lögun lífverunnar og uppröðun bakteríanna. Alkalísk litarefni eru almennt notuð fyrir einfalda litun, vegna þess að í hlutlausum, basískum eða veikt súrum lausnum eru bakteríufrumur venjulega neikvætt hlaðnar, og þegar basísk litarefni eru jónuð er litunarhluti sameinda þeirra jákvætt hlaðinn, þannig að litunarhluti basískra litarefna. geta auðveldlega bundist bakteríunum til að gera bakteríurnar litaðar. Lituðu bakteríufrumurnar eru í mikilli andstæðu við bakgrunninn og auðveldara er að þekkja þær undir smásjá. Algengt notuð litarefni fyrir einfalda litun eru merósýanínblátt, kristalfjólublátt og grunnefnasamband rautt. Þegar baktería niðurbrot sykurs til að framleiða sýru þannig að sýrustig miðilsins lækkar, eykst jákvæð hleðsla baktería, og þá er hægt að nota það í rauðum, súrum rauðum eða Kongó rauðum og öðrum súrum litarefnum litun. Bakteríur verða að vera festar áður en litað er. Tilgangur þess er tvíþættur: einn er að drepa bakteríurnar og láta bakteríurnar festast við rennibrautina; annað er að auka sækni þess í litarefnið. Tvær aðferðir eru almennt notaðar: hitun og efnafesting. Reyndu að viðhalda upprunalegu formgerð frumanna við festingu.
3 Efni
3.1 Stofn Bacillus subtilis 12-18h næringaragar hallaræktun, Staphylococcus aureus um 24 klst næringaragar hallaræktun, Escherichia coli 24h næringaragar hallaræktun, bakarager agar hallaræktun.
3.2 Blettur Lue's basískur metýlenblár blettur (eða ammoníumoxalat kristalfjólublettur), rauður blettur með karbólínsýrusambandi.
3.3 Hljóðfæri eða önnur áhöld Smásjá, sprittlampi, rennibraut, sáningarhringur, glerauguhaldari, tvílaga flaska (fyllt með sedrusviðolíu og xýleni), smásjápappír, lífeðlisfræðilegt saltvatn eða eimað vatn o.s.frv.
4 Aðferð Strok → þurrkun → festing → litun → þvottur → þurrkun → smásjá skoðun.
5 skref
5.1 strok Taktu tvær hreinar og olíulausar glærur, hvor með smá dropa af saltvatni (eða eimuðu vatni) í miðju glærunnar við smitgát, með sáningarhring til að virkja með smitgát, hvort um sig, frá Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus og Escherichia coli halla til að tína smá mosa í dropann af vatni, blandað saman og húðað með filmu. Ef bakteríusviflausnin (eða vökvaræktin) strokið, má nota til að sáð hringinn velja 2 til 3 hringa beint á glæruna. Athugaðu að saltvatnið (eimað vatn) og taka bakteríurnar ætti ekki að vera of mikið og dreift jafnt, ekki of þykkt.
5.2 Þurrkun Þurrkaðu náttúrulega við stofuhita. Það er líka hægt að þurrka það með því að hita aðeins yfir sprittlampa með húðuðu hliðina upp. Hins vegar, ekki komast of nálægt loganum, því hitastigið er of hátt mun eyðileggja formgerð bakteríanna.
5.3 Festing Ef hitaþurrkun er notuð er festing og þurrkun sameinuð í eitt skref á sama hátt og þurrkun. Smyrjið, þurrkið og hitið.
5.4 Litun Settu glæruna flata á rennibrautarhilluna, bættu 1 til 2 dropum af litunarlausn á strokið (litunarlausnin hylur strokfilmuna rétt). Litaðu strokið með Lü's Basic Mellanox Blue í 1~2mín, og með Carbonate Red (eða ammoníumoxalat kristalfjólubláu) í um 1mín.
5.5 Skolun Hellið litunarlausninni af og skolið varlega með kranavatni frá öðrum enda rennunnar þar til vatnið sem rennur niður úr strokinu er litlaus. Þegar þú skolar skaltu ekki láta vatnið renna beint til að þvo húðað yfirborðið. Vatnsrennslið ætti ekki að vera of hratt eða of stórt til að forðast að losa strokfilmuna.
5.6 Þurrkun Hristið af sér vatnsdropana á rennibrautinni til að þorna náttúrulega, hægt er að blása eða gleypið pappír til að draga í sig þurrt (passið að þurrka ekki af bakteríulíkama). 5.7 Smásjárskoðun Strokið er þurrkað og skoðað með smásjá. Strokið verður að vera alveg þurrt áður en hægt er að sjá það með olíusmásjá.
6 Niðurstöður Teiknaðu formgerð E. coli og Micrococcus garciniae eftir staka litun.
Gram blettur
1 Tilgangur
1.1 Að skilja meginregluna um Gram litun og mikilvægi þess við flokkun og auðkenningu baktería.
1.2 Að læra og ná tökum á Gram litunartækninni og styrkja lærdóminn um notkun olíulinsunnar í ljóssmásjánni.
