Litunaraðferðir og smásjárskoðun á örverum
1. Tilgangur
1.1 Lærðu grunntækni við örverustrok og litun.
1.2 Náðu tökum á einföldu litunaraðferðinni á bakteríum.
1.3 Skilja til bráðabirgða formfræðileg einkenni baktería og treysta þekkingu á því hvernig á að nota olíulinsur og smitgát.
2 Meginreglur
Smurning og litun á bakteríum er grunntækni í örverufræðitilraunum. Bakteríufrumur eru litlar og gagnsæjar, sem gerir það erfitt að greina þær undir venjulegri ljóssmásjá; þær verða að vera litaðar. Eitt litarefni er notað til að lita bakteríur, þannig að lituðu bakteríurnar mynda skýran litamun frá bakgrunninum, þannig að hægt sé að sjá formgerð þeirra og uppbyggingu betur. Þessi aðferð er auðveld í notkun og hentug til að fylgjast með almennri lögun bakteríufrumna og fyrirkomulagi baktería. Grunnlitarefni eru almennt notuð fyrir einfalda litun. Þetta er vegna þess að í hlutlausum, basískum eða veikt súrum lausnum eru bakteríufrumur venjulega neikvætt hlaðnar og þegar grunn litarefni eru jónuð er litunarhluti sameinda þeirra jákvætt hlaðinn, þannig að þær eru basískar. Litandi hluti litarefnisins sameinast auðveldlega bakteríum til að lita þá. Lituðu bakteríufrumurnar eru í mikilli andstæðu við bakgrunninn, sem gerir það auðveldara að bera kennsl á þær undir smásjá. Litarefni sem almennt eru notuð við einfalda litun eru meðal annars metýlenblátt, kristalfjólublátt, basískt fúksín osfrv. Þegar bakteríur brjóta niður sykur og framleiða sýru, sem veldur því að pH ræktunarmiðilsins lækkar, eykst jákvæða hleðslan á bakteríunum. Á þessum tíma er hægt að nota súr litarefni eins og eósín, sýrufúksín eða Kongórautt til litunar. Bakteríur verða að laga áður en litað er. Það hefur tvo tilgangi: einn er að drepa bakteríur og láta þær festast við glerrennuna; hitt er að auka sækni þeirra í litarefni. Tvær algengar aðferðir eru hitun og efnafesting. Þegar þú festir skaltu reyna að viðhalda upprunalegu lögun frumanna.
3 efni
3.1 Bakteríur: Bacillus subtilis 12-18h næringaragar hallaræktun, Staphylococcus aureus 24h næringaragar hallaræktun, Escherichia coli 24h næringaragar hallaræktun, bakarager agar hallaræktun.
3.2 Litunarefni: Lu's basískt metýlenblátt litarefni (eða ammoníumoxalat kristalfjólublátt litarefni), karbólínsýra fuchsin litarefni.
3.3 Hljóðfæri eða önnur áhöld: smásjá, sprittlampi, rennibraut, sáningarlykkja, rennilás, tveggja laga flaska (inniheldur sedrusviðolíu og xýlen), linsuvefur, lífeðlisfræðilegt saltvatn eða eimað vatn o.s.frv.
4. Aðferð: strok → þurrkun → festing → litun → þvottur → þurrkun → smásjá skoðun.
5 skref
5.1 Strok: Taktu tvær hreinar og olíulausar glerglas. Við dauðhreinsaðar aðstæður skaltu setja lítinn dropa af venjulegu saltvatni (eða eimuðu vatni) á hverja miðju glerglassins. Notaðu sáningarlykkju til að dauðhreinsa bakteríurnar úr Bacillus subtilis. , Micrococcus luteus og Escherichia coli, tíndu smá bakteríuflöt í vatnsdropana á halla, blandaðu vel saman og settu það í þunnt lag. Ef þú notar bakteríusviflausn (eða fljótandi ræktun) strok geturðu notað sáningarlykkju til að velja 2 til 3 lykkjur og setja þær beint á glæruna. Gætið þess að missa ekki of mikið lífeðlisfræðilegt saltvatn (eimað vatn) og fjarlægið bakteríur og berið á það jafnt og ekki of þykkt.
5.2 Þurrkun Þurrkaðu náttúrulega við stofuhita. Þú getur líka hitað það aðeins yfir sprittlampa með húðuðu hliðina upp til að þurrka það. En vertu viss um að fara ekki of nálægt loganum, þar sem of hátt hitastig eyðileggur formgerð bakteríanna.
5.3 Festing Ef notuð er hituð þurrkun er festing og þurrkun sameinuð í eitt þrep og er aðferðin sú sama og þurrkun. Smyrja, þurrka og hita-fix.
5.4 Litun: Settu rennibrautina flata á rennibrautargrindina og bættu 1 til 2 dropum af litarlausn á strokið (það er viðeigandi að litarlausnin hylji strokfilmuna). Litaðu með Lu's basískum metýlenbláu í 1 til 2 mínútur og litaðu með karbólínsýrufuchsin (eða ammoníumoxalat kristalfjólubláu) í um það bil 1 mínútu.
5.5 Þvottur með vatni: Hellið litarlausninni af og skolið varlega með kranavatni frá öðrum enda rennunnar þar til vatnið sem rennur niður úr strokinu er litlaus. Þegar þvegið er með vatni má ekki þvo húðaða yfirborðið beint með vatni. Vatnsrennslið ætti ekki að vera of hratt eða of stórt til að koma í veg fyrir að strokfilman detti af.
5.6 Þurrkun: Hristið vatnsdropana af rennibrautinni og þurrkið á náttúrulegan hátt, blásið með hárþurrku eða dragið í sig með gleypið pappír (passið að þurrka ekki bakteríurnar af). 5.7 Smásjárskoðun Eftir að strokið er þurrt skal framkvæma smásjárskoðun. Strokið verður að vera alveg þurrt áður en það er skoðað með olíulinsu.
6 Niðurstöður Teiknaðu formgerð E. coli og Micrococcus luteus sem sést eftir staka litun.
