Munurinn á (tveggja ljósmynda, rugli) flúrljómun smásjá og venjulegs smásjá
Grunnreglan um tveggja ljósmynda örvun er sú að við mikla ljóseindþéttleika geta flúrljómandi sameindir samtímis tekið upp tvær langar bylgjulengdar ljóseindir og sent frá sér styttri bylgjulengd ljóseind eftir stuttan tíma af svokölluðum spennandi líftíma; Áhrifin eru þau sömu og að nota ljóseind með helmingi bylgjulengdar langrar bylgjulengdar til að vekja flúrperur. Tvær ljóseindarörvun krefst mikils ljóseindarþéttleika og til að forðast að skemma frumur notar tveggja ljósmynda smásjá háorku-losaða púls leysir. Laserinn sem þessi leysir gefur frá sér hefur mikla hámarksorku og litla meðalorku, með púlsbreidd aðeins 100 femtoseconds og tíðni allt að 80 til 100 megahertz. Þegar þú notar hátt tölulegt ljósop á hlutlægu linsu til að einbeita ljóseindum pulsed leysir, er ljóseindarþéttleiki í þungamiðju hlutlægu linsunnar hæsti og tveggja ljósmynda örvun kemur aðeins fram á þungamiðju hlutlægu linsunnar. Þess vegna þarf tveggja ljósmynda smásjá ekki ruglað pinhole, sem bætir skilvirkni flúrljómunargreiningar.
Almennt flúrljómun fyrirbæri, vegna lítillar ljóseindarþéttleika örvunarljóssins, getur flúrljómandi sameind aðeins tekið upp eitt ljóseind í einu og síðan sent frá sér aðra flúrljómandi ljóseind með geislunarbreytingum, sem er þekktur sem stakur ljóseindarflúrljómun. Fyrir örvunarferli með flúrljómun með því að nota leysir sem ljósgjafa, geta tveggja ljósmynda eða jafnvel fjölflúrflúrljómandi fyrirbæri komið fram. Í þessu tilfelli hefur örvunar ljósgjafinn sem notaður er með mikinn styrk og ljóseindarþéttleika sem uppfyllir kröfuna um flúrperur til að taka upp tvær ljóseindir samtímis. Í því ferli að nota almennan leysir sem örvunar ljósgjafa er ljóseindarþéttleiki enn ófullnægjandi til að framleiða tveggja ljósmynda frásogsfyrirbæri. Venjulega eru femtosecond púls leysir notaðir, þar sem tafarlaus kraftur nær megawatt stigi. Þess vegna er bylgjulengd tveggja ljósmynda flúrljómun styttri en örvunarljósið, sem jafngildir áhrifum sem framleidd eru með hálfri örvunar bylgjulengd örvun.
Þekking sem tengist confocal flúrljómun smásjá
Grunnreglan um ruglingsflúrljómun smásjá er að nota punkt ljósgjafa til að geisla sýnishornið og mynda vel skilgreindan lítinn ljósblett á brennivíddinni. Flúrljómunin sem gefin er út frá þessum stað eftir að geislun er safnað með hlutlægu linsunni og send aftur meðfram upprunalegu geislunarstígnum að geislaspírunarmanninum sem samanstendur af tvíhverfu spegli. Litrófsmælirinn sendir flúrljómun beint til skynjara. Það er pinhole fyrir framan bæði ljósgjafann og skynjara, kallað lýsingarholið og greiningarholið, hver um sig. Geometric víddir þessara tveggja eru stöðugar, um það bil 100-200 nm; Í samanburði við ljósastaðinn á brennivíddinni eru þeir tveir samtengdir, sem þýðir að ljósbletturinn fer í gegnum röð linsna og geta á endanum einbeitt sér bæði að lýsingarholinu og uppgötvun pinhole samtímis. Á þennan hátt getur ljós frá brennivíddinni farið saman innan sviðs uppgötvunarholunnar, en dreifðu ljósi að ofan eða undir brennivíddinni er lokað fyrir utan uppgötvunargatið og er ekki hægt að mynda. Skannar sýnishornið með punkti með leysir, ljósritunarrörið eftir að hafa greint pinhole fær einnig samsvarandi ruglingsmynd af ljósastaðnum fyrir punkt, breytir því í stafrænt merki og sendir það á tölvuna og safnar því loksins saman í skýra ruglað mynd af öllu brennivíddarplaninu á skjánum.
