Mæling á rúmmáli vefjablokka með líffræðilegum smásjám
Hingað til eru frystifesting, frosin ör-þunn sneiðing og frost-þurrkun venjubundnar aðferðir við vefja- og frumuröntgen--smásjárskoðun. Vinsamlegast gefðu upp eftirfarandi upplýsingar varðandi þessa aðferð:
Líffræðileg smásjá með sviðsljósi getur fært sviðsljósið upp og niður til að ná í meðallagi birtustigi og einnig er hægt að breyta ljósopi breytilegra ljósops til að ná í meðallagi birtu. Ef ljósið er frá sólinni er hægt að hækka sviðsljósið á viðeigandi hátt og stækka ljósop breytilegra ljóss á viðeigandi hátt. Ef ljósið er of sterkt er hægt að lækka kastljósið á viðeigandi hátt og hægt er að minnka ljósop gatnamótanna á viðeigandi hátt. Ef þér finnst þú enn töfrandi í þessum aðstæðum geturðu valið að setja viðeigandi síu á festinguna undir sviðsljósinu. Þessi eik getur náð birtu sem fullnægir þér. Að stilla efri og neðri stöðu sviðsljóssins getur auðvitað breytt ljósopsstærð ljóslestarins og valið viðeigandi síur, sem krefst ákveðins tíma af æfingum og reynslu.
Mjög mikilvægt atriði í líffræðilegri smásjá er ferlið við sýnatöku og einangrun frumna. Eftir fryst-þurrkun og innfellingu plastefnis (FD) verður að vinna frosna ofur-þunnu hlutana vandlega til að tryggja að innihald 65 frumefna hvers hluta skemmist ekki við athugun og greiningu. Vegna fjölda skrefa og mikils kostnaðar sem fylgir röntgen-smágreiningu er því miður að draga rangar ályktanir ef greindu frumurnar eru skemmdar eða dauðar eftir langvarandi og margþættan-þrepa vinnslu. Hjartafrumur sem eru aðskildar með gelatínasameðferð hafa tvenns konar form, önnur er langur stafur-laga og hin er hringlaga. Hið síðarnefnda vísar til deyjandi frumna sem skemmast við aðskilnað frumna.
Innihald og dreifing raflausna í þessum tveimur tegundum frumna er mjög mismunandi í líffræðilegri smásjá. Na er mjög hátt og K er mjög lágt í hringlaga hjartavöðvafrumum og styrkur Ca í línulegum dendritum er mjög hár. Eftir sannprófun með öðrum greiningaraðferðum hefur verið sannað að hátt Na og lágt K í hringlaga frumum og hátt Ca í hvatberum eru afleiðing himnuskemmda við frumuskilnað. Kaldafestingaraðferðin fyrir frumur og vefi felur oft í sér að slökkva er fyrst og síðan geymt í fljótandi köfnunarefni. Slökkvandi festing skiptir sköpum fyrir varðveisluáhrifin. Lifandi frumur eða ferskur vefur eru ríkur af vatni og þegar slökkt er á þeim eru þeir hlutar frumanna eða vefja sem komast í beina snertingu við kælimiðilinn (sérstaklega þegar fljótandi köfnunarefni er notað til kælingar) oft frosið og fest fyrst og myndar „skel“ sem kemur í veg fyrir að miðhluti frumanna verði mulinn og festur. Þess vegna kemur oft í ljós að ískristallar eru í miðhluta stærri frumna þegar röntgengeisla örgreining er framkvæmd. Til að koma í veg fyrir að þetta gerist er efni með bræðslumark hærra en fljótandi köfnunarefnis en lægra um 806c notað sem kælimiðill. Mörg þessara efna eru til, en auðvelt er að fá þau og ódýrast er þykkt própan (suðumark 42,120c, bræðslumark 187,10c, mólþyngd 44,1), sem einnig hefur hraðan kælihraða. En ókosturinn er sá að hann er eldfimur.
